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【摘 要】通过改造来源于软化类芽胞杆菌Paenibacillusmacerans的环糊精糖基转移酶（Cyclodextringlycosyltransfe豫se，CGT酶）的＋1亚位点提高其对麦芽糊精的底物特异性，并进一步提高以麦芽糊精为糖基供体催化合成2-O-D-吡喃葡糖基-L-抗坏血酸（AA．2G）的效率。首先对＋l亚位点附近的3个氨基酸残基Leul94、Ala230和His233分别进行定点饱和突变，得到3个优势突变体L194N（亮氨酸一天冬酰胺），A230D（丙氨酸一天冬氨酸），H233E（组氨酸一谷氨酸），然后以这3个优势突变体为模板进一步进行两点和三点复合突变，获得7个复合突变体。研究结果表明，突变体L194N／A230D／H233E以麦芽糊精为底物合成AA．2G的产量最高，达到1．95g／L，比野生型CGT酶提高了62．5％。对获得的突变体进行动力学分析，发现高浓度的底物L．AA对突变型CGT酶催化的酶促反应具有抑制作用。确定了突变体酶促反应的最适温度、pH和反应时间。模拟突变体的三维结构并进行分析，突变体底物特异性的改善可能与CGT酶第194位、230位和233位的氨基酸残基的亲水性及与底物分子间的作用力的改变有关。