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【摘 要】RNAi技术在抗HIV-1治疗研究中已显示出巨大潜力，获得可高效特异抑制HIV-1的RNAi元件是进行相关研究的重要基础。miRNA在抑制和表达方式上相比siRNA具有更多的优势。本研究即探讨构建可高效特异靶向HIV-1的人工miRNA元件。选择以保守性较好的HIV-1 pol基因为靶区筛选高效保守的RNAi序列，设计了16个可靶向pol区高保守区段的RNAi靶点，构建表达载体与HIV-1感染性克隆进行共转染抑制实验，筛选显示pol1026序列兼具高保守性及高抑制效率特点。以天然miR-30a为基础骨架构建了靶向pol1026靶点的人工miRNA元件，通过与HIV-1感染性克隆质粒的共转染抑制实验验证获得了可有效抑制HIV-1表达的人工miRNA元件（miR-1026E）。通过与携带靶序列的报告质粒的共转染实验证明miR-1026E具有良好的靶点特异性。本研究进一步构建了携带miR-1026E表达元件的重组慢病毒，转导MT_4细胞并对转导后细胞进行克隆化筛选，获得稳定整合miR-1026E表达元件的MT-4．miR1026E细胞克隆，该细胞在体外攻毒实验中可高效抑制HIV-1的复制，具有显著的抑制HIV-1的能力。同时应用实时RT-PCR方法检测显示，miR-1026E在细胞中不会影响内源性代表miRNA（miR-181与miR-16）的表达水平和干扰素效应相关基因statl的表达水平，具有良好的特异性。所获得的可特异高效抑制HIV-1复制的人工miRNA元件可为抗HIV-1研究提供重要参考。