【出 处】：

【作 者】：

【摘 要】本实验室筛选出一株具有不对称拆分消旋酮基布洛芬氯乙酯的菌株NK13为材料，经鉴定为巨大芽孢杆菌Bacillus megaterium。通过构建其基因文库，从中筛选得到阳性克隆重组子pUC-NK1。测序分析表明，该重组子质粒中包含一长度为633bp的脂肪酶基因的完整开放阅读框，核苷酸同源性对比证明该脂肪酶基因属首次发现（Gen Bank Accession No．EU381317），将此基因克隆到原核表达载体pET21b（＋）中构建重组表达质粒pET-NKestl，转化Escherichia coli BL21，经lsopropyl-β-D-Thiogalactoside（IPTG）诱导在宿主菌中得到表达，经SDS—PAGE电泳检测证明该脂肪酶成熟蛋白分子量约为20kDa。薄层层析与HPLC检测结果显示，表达菌株转化外消旋酮基布洛芬氯乙酯得到（回．酮基布洛芬过量（e．e．％），由野生菌NK13的5．84％提高到75．28％，提高约15倍，说明该脂肪酶具有优先拆分得到（S）。酮基布洛芬的特性。