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【摘 要】为建立平滑肌特异的固醇调节元件结合蛋白（SREBP）的裂解激活蛋白（SCAP）超表达的转基因小鼠，深入探讨SCAP的功能，本实验构建了由平滑肌特异蛋白SM22启动子（pSM22）启动仓鼠SCAP 443位点突变体-SCAP（D443N）的真核表达质粒，并在仓鼠卵巢细胞（CHO）验证其表达。利用巢式PCR从小鼠肝脏组织提取的基因组中扩增得到pSM22基因。先将其插入pMD—T载体，构建T-SM22，对pSM22测序后，通过双酶切将pSM22克隆到pGL3-control-Luc中，成为pGL3-SM22-Luc。转染pGL3-SM22-Luc到血管平滑肌（VSMCs）中，通过检测荧光素酶（Luc）值观察pSM22在VSMCs内的启动活性。利用PCR从pTK-HSV-SCAP（D443N）质粒中扩增出SCAP（D443N）后克隆入pGL3-control中，成为pGL3-SCAP。然后再将pSM22克隆入pGL3-SCAP中，成为表达质粒pGL3-SM22-SCAP（D443N）。转染表达质粒到CHO细胞，用real—time PCR和Western blotting验证SCAP（D443N）的表达。结果证实pSM22在体外VSMCs中能启动Luc的表达；表达质粒pGL3-SM22-SCAP（D443N）酶切及测序结果正确：将其转染到CHO细胞后，与转染pGL3-control的对照细胞相比SCAP（D443）mRNA和蛋白表达显著增强。