【出 处】：

【作 者】：

【摘 要】本研究利用基因重组技术构建人IL35-IgG4（Fc）融合基因真核表达载体，稳定转染CHO／DG44细胞并检测重组蛋白的表达。主要采用聚合酶链式反应（PCR）从酯多糖（Lipopolysaccharides，LPS）诱导的人髓性白血病细胞株KG—IcDNA文库中克隆EBl3和IL-12p35 cDNA，重叠PCR法连接2个片段，并克隆到IgG4（Fc）-pOptiVECTM—TOPO载体上，对新构建的IL-35-IgG4（Fc）pOptiVEC^TM-TOPO真核表达载体并进行酶切、测序、PCR鉴定；脂质体法转染CHO／DG44细胞：RT-PCR检测转染结果，采用a—MEM^-培养基筛选实验组细胞，对筛选的阳性克隆细胞再进行氨甲喋呤（Methotrexate，MTX）的加压筛选，ProteinG—Agarose纯化阳性克隆培养上清，免疫印迹检测目的蛋白表达。结果显示IL-35-IgG4（Fc）pOptiVEC^TM-TOPO表达载体稳定转染CHO／DG44细胞并获得阳性克隆；SDS—PAGE电泳得到一条与预期相对分子质量大小相符的蛋白条带；该蛋白能与羊抗人IgG4抗体特异结合。本实验获得了能够稳定表达具有稳定结构的IL35-IgG4（Fc）融合蛋白的CHO／DG44细胞株。